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商品資訊
10×Tris-醋酸转膜缓冲液(湿转,粉末型)
产品编号
产品名称
规格
TA5030P
10×Tris-醋酸转膜缓冲液(湿转,粉末型)
500 ml
● 简介:
10×Tris-醋酸转膜缓冲液是专门用于Tris-醋酸系统分离高分子量蛋白后转膜的缓冲液。建议用于Western时湿转转膜,为方便客户使用,10×转膜缓冲液中没有添加甲醇和SDS,客户根据需要配制1×转膜缓冲液时自行添加。
● 保存、运输和贮存:
常温保存,有效期两年。
配成溶液后建议4℃保存,有效期6个月。
1×即用型转膜缓冲液建议现用现配,不建议保存。
● 转膜缓冲液配制:
1. 10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型)配制:
原料
10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型)500 ml
10×Tris-醋酸转膜缓冲液(湿转,粉末型)
取TA5030P全部粉末溶于500 ml超纯水中,即配制成500 ml 10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型)
2. 1×即用型Tris-醋酸转膜缓冲液配制:
1×即用型转膜缓冲液 配制量 1升
10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型)
100 ml
变性蛋白
非变性蛋白
<20 kD蛋白
无水甲醇
20%
5-10%
SDS
0.01%
0.01%
20-80 kD蛋白
无水甲醇
10%
0-5%
SDS
0.05%
0.05%
>80 kD蛋白
无水甲醇
10%(NC膜)
0-5%(PVDF膜)
0%
SDS
0.1%
0.1%
超纯水
定容至1升,不要调节pH,pH~7.2
注:甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在膜上,而SDS让蛋白更加离开膜。因此对大蛋白转膜来说,多加SDS,少加甲醇;而对小蛋白转膜,多加甲醇,少加SDS。
● 转膜:
1. 膜的选择:转膜可以选择PVDF膜或NC膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来,大于20 kD蛋白选择0.45 μm孔径,低于20 kD选择0.22 μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化。
蛋白转膜三明治制作:
负极(电转夹黑色面)-海绵垫-1层1 mm厚度滤纸-凝胶-膜-1层1 mm厚度滤纸-海绵垫-正极(电转夹白色面)
3. 转膜条件:
以下转膜条件仅供参考,客户针对自己的目的蛋白,最好经过1-2次预实验后,确定最佳的转膜条件。
膜孔径
蛋白大小
稳流
建议时间
降温措施
0.22 μm
低于20 kD
200 mA
~30分钟
不需要
0.45 μm
20-50 kD
300 mA
~45分钟
需要
0.45 μm
50-200 kD
350 mA
~50分钟
需要
0.45 μm
高于200 kD
350 mA
~2.5-4.5小时
需要
-
商品Q&A