10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液（湿转，溶液型）
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商品資訊
10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液（湿转，溶液型）
产品编号
产品名称
规格
TB1040
10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液（湿转，溶液型）
500 ml
● 简介：
10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液（湿转，溶液型）可以用于Western时湿转转膜，原始配方是 Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。为方便客户使用，10×转膜缓冲液中没有添加甲醇和SDS，客户根据需要配制1×转膜缓冲液时自行添加。
● 保存、运输和贮存：
常温保存，有效期两年。
配成溶液后建议4℃保存，有效期6个月。
1×即用型转膜缓冲液建议现用现配，不建议保存。
● 1×即用型转膜缓冲液配制方法：
1×即用型转膜缓冲液 配制量 1升
10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液
100 ml
变性蛋白
非变性蛋白
＜20 kD蛋白
无水甲醇
20%
5-10%
SDS
0.01%
0.01%
20-80 kD蛋白
无水甲醇
10%
0-5%
SDS
0.05%
0.05%
＞80 kD蛋白
无水甲醇
10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
0%
SDS
0.1%
0.1%
超纯水
定容至1升，不要调节pH，pH~8.3
注：甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在胶上，而SDS让蛋白更加离开胶。因此对大蛋白转膜来说，多加SDS，少加甲醇；而对小蛋白转膜，多加甲醇，少加SDS。
● 转膜：
1. 膜的选择：转膜可以选择PVDF膜或NC膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来，大于20 kD蛋白选择0.45 μm孔径，低于20 kD选择0.22 μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化。
蛋白转膜三明治制作：
负极（电转夹黑色面）-海绵垫-1层1 mm厚度滤纸-凝胶-膜-1层1 mm厚度滤纸-海绵垫-正极（电转夹白色面）
3. 转膜条件：
以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。
膜孔径
蛋白大小
稳流
建议时间
降温措施
0.22 μm
低于20 kD
200 mA
~30分钟
不需要
0.45 μm
20-50 kD
300 mA
~45分钟
需要
0.45 μm
50-200 kD
350 mA
~50分钟
需要
0.45 μm
高于200 kD
350 mA
~2.5-4.5小时
需要
-
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