购买前先必读

非变性蛋白电泳Marker转膜问题

http://www.real-times.com.cn/news_detail.aspx?NewsID=248

---

非变性电泳蛋白质Marker（45-880 kD）

Native Electrophoresis Protein Marker（45-880 kD）

●产品编号及规格：

RTD6137   20次 100 μl

●储存及运输条件：

-20℃保存，湿冰运输，有效期为12个月。

● 产品简介：

    本产品有4种蛋白组成，分子量范围为45-880 kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到5条主带。

蛋白名称	分子量(kD)	蛋白来源	pI	说明
Ferritin	440 880	equine spleen	N/A	非变性下440kD和880 kD
Carbonic Anhydrase	300	Bovine Erythrocytes	6.4	单体分子量29kD，非变性下为多聚体，表现为多种电荷异构体（charge isomer）
Albumin	66	bovine serum	4.6-5.8	球蛋白，单体分子量66 kD，非变性下可形成少量二聚体
Ovalbumin	45	egg white	4.71或 4.59	球蛋白，分子量为45kD，非变性条件下大于45kD会出现电荷异构体（charge isomer）

● 使用说明：

1. 取出产品后，常温融化后，彻底混匀，上样电泳。

注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，1.0厚度10齿梳子加样孔上样5 μl，1.0厚度15齿梳子加样孔上样量2.5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。

2. 该产品不含蛋白凝胶制备试剂，您可以选择非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号：RTD6130）或者蛋白预制胶（货号RTD6118）。如自备试剂，经典Laemmli系统中把制胶溶液、电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂（DTT或β-巯基乙醇）全部去除即可进行非变性电泳。

3. 电泳条件：

建议使用8%非变性等度胶或者4-15%非变性梯度胶进行电泳。

恒电压	150-200 V
起始电流	27-35 mA/板胶
结束电流	7-10 mA/板胶
电泳时间	50-80min+

4. 电泳结束后，考马斯亮蓝染色，观察结果。

注：使用银染染色时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，需要适当降低Marker上样量，一般稀释50倍后上样。

注意：

1.本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳(SDS-PAGE)。
2. 蛋白非变性电泳条件下，不能精确判断蛋白的分子量大小。因为在非变性条件下，蛋白的电荷，空间结构，物化性质等都对蛋白的迁移有影响。
3.非变性蛋白电泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白的天然结构，都没有偶联染料，在电泳时基本都看不到条带；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白中含有铁离子，使得电泳后在胶上可见淡黄色，其中440 kD颜色更深。凝胶转膜后，膜上也可以看到黄色的440 kD条带，可以大体判断Marker转膜的效果。
4. 非变性Marker转膜后可以后用丽春红染色液（货号：RTD6301）染膜，可以看到Marker条带，顺便可以检测转膜效率，然而要注意的是丽春红染色灵敏度比较低，可能不能完全看到完整的Marker条带。

 

● 实验示例：