蛋白浓缩试剂盒（目录号：RTD9101）

● 试剂盒内容及保存：

 

货号	产品名称	规格	贮存
RTD9101-01	试剂A-沉淀溶液	10 ml	RT
RTD9101-03	试剂C-助沉剂	5 ml	RT
RTD9101-04	试剂D-中和液	250 μl	RT
RTD9101-05	1 M NaCl	1 ml	RT
RTD9101-06	1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）	1 ml	-20℃
	说明书	1份

 

● 储存条件和效期：

试剂盒常温运输；收到后，按照标签温度贮存；本试剂盒有效期1年。

● 产品简介：

试剂盒原理：在酸性条件下蛋白质形成不溶性盐，使蛋白质变性导致构象发生改变，蛋白暴露出较多的疏水性基团，蛋白发生聚集而沉淀。为了避免酸对后续电泳的影响，沉淀的蛋白要使用丙酮等洗涤液彻底清洗去除酸。浓缩后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白样品处理。

以每次浓缩800 μl蛋白样品计算，本试剂盒可以使用40-45次。

● 操作方法：

1.  准备1.5 ml干净的离心管，加入800 μl蛋白样品溶液。

可选：如果样品溶液中离子强度低于10 mM，补加8 μl的1M NaCl溶液。低于800 μl的样品，加入8 μl 1 M NaCl，用水补齐体积至800 μl，使NaCl终浓度为10 mM。

2. 加入蛋白溶液1/10体积的试剂C-助沉剂-80 μl，混匀，常温静置15分钟。

注：加入试剂C后溶液变浑浊。

3.  加入步骤2溶液1/4体积的试剂A -220 μl，涡旋震荡10-30秒，使之充分混匀。

4.  冰浴放置15分钟。

5. 4℃，12000 rpm（13000 g）离心10 分钟。 注：离心后白色蛋白沉淀弥散性可见于离心管管壁上。

6.  小心去掉上清液，保留沉淀。

注：请小心操作，可以用移液器辅助彻底吸弃上清。

7.  沉淀中加入600 μl预冷的丙酮（自备，试剂盒不提供），涡旋震荡10-30秒，彻底混匀。

   注：丙酮有刺激性气味，请在通风橱内操作。

8.  冰浴15分钟。

9. 4℃，12000 rpm（13000 g) 离心10分钟；在通风橱中，倒掉上清。残留上清用10 μl吸头彻底吸弃，沉淀物通风晾干30-60秒。注：沉淀不能过分干燥，否则将导致蛋白不好溶解。

10. 蛋白溶解：

根据下表选择溶解缓冲液：

下游实验	溶解缓冲液		备注
SDS-PAGE电泳	1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）	试剂盒提供	加入溶解缓冲液后，彻底溶解沉淀（37℃温浴处理），溶液正常颜色应为蓝色；如果溶液为淡绿色或黄色，加入1/10体积中和液D，使颜色变回蓝色。 95℃ 处理5分钟，电泳上样
BCA蛋白定量	40mM 碳酸钠pH11.25	试剂盒不提供	BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度
等电聚焦IEF/2D电泳	7M尿素，2M硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或1% ASB-14 pH10.4	试剂盒不提供
酶切实验	100 mM碳酸氢铵 pH8.5	试剂盒不提供

 

 

●实验示例：